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        薄層色譜法標準操作規程
        
            
        2017-08-02
        
            
        
                1、簡(jiǎn)述：薄層色譜法，是將適宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均勻薄層。等點(diǎn)樣、展開(kāi)后，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用以進(jìn)行藥品的鑒別，雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。
        
2、儀器與材料：
        
2.1 玻板：除另有規定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的規格，要求光滑，平整、洗凈后的不附水珠，晾干。
        
2.2 固定相或載體：最常用的有硅膠G、硅膠GF、硅膠H、硅膠HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小，一般要求直徑為10-40μm。薄層涂布，一般可分無(wú)粘合劑和含粘合劑兩種；前者系將固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合劑，一般常用10-15%煅石膏(CaSO4·2H2O在140℃烘4小時(shí))，混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5-0.7%)適量調成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。也有含一定展開(kāi)液或緩沖液的薄層。
        
2.3 涂布器：應能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。
        
2.4 點(diǎn)樣器：常用具支架的微量注射器或定時(shí)毛細管，應能使點(diǎn)樣位置正確集中。
        
2.5 展開(kāi)室：應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開(kāi)缸，并有嚴密蓋子，除另有規定外，底部應平整光滑，應便于觀(guān)察。
        
3、操作方法：
        
3.1 薄層板制備：除另有規定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平穩地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2-0.3mm)，取下涂好薄層的玻璃板，置水平臺上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘。即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過(guò)透射光和反射光檢視)。
        
3.2 點(diǎn)樣：除另有規定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊2.0cm，點(diǎn)樣直徑為2-4mm，點(diǎn)間距離約為1.5-2.0cm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。
        
3.3 展開(kāi)：展開(kāi)室如需預先用展開(kāi)劑飽和，可在室中加入足夠量的展開(kāi)劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開(kāi)劑中，密封室頂的蓋，使系統平衡或按正文規定操作。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)室的展開(kāi)劑中，浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板底邊0.5-1.0cm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中)，密封室蓋，等展開(kāi)至規定距離(一般為10-15cm)，取出薄層板，晾干，按各品種項下的規定檢測，如需用薄層掃描儀對色譜斑點(diǎn)作掃描檢出，或直接在薄層上對色譜斑點(diǎn)作掃描定量，則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法，除另有規定外，可根據各種薄層掃描儀的結構特點(diǎn)及使用說(shuō)明，結合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙波長(cháng)或單波長(cháng)掃描。由于影響薄層掃描結果的因素很多，故應在保證供試品的斑點(diǎn)在一定濃度范圍內呈線(xiàn)性的情況下，將供試品與對照品在同一塊薄層上展開(kāi)后掃描，進(jìn)行比較并計算定量，以減少誤差。各種供試品，只有得到分離度和重現性好的薄層色譜，才能獲得滿(mǎn)意的結果。
        
4、注意事項：
        
4.1 所用玻璃板應洗凈不掛水珠，光滑平整。
        
4.2 鋪板要均勻，厚度適宜，并于室溫下晾干后在110℃活化30分鐘，置于有干燥劑的干燥箱或干燥器中備用。
        
4.3 點(diǎn)樣點(diǎn)一般為圓點(diǎn)，不能太大。
            
        
                 
        
        
       
    
        
    
        
    

        

    
        
    


        
    

        


        
    
        
        
    
        

        





        
    
        
        
        
    
        

        


    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    



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